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    鐮刀菌屬(層出鐮孢菌)的實驗內容與操作流程!
    小楊 / 2023-07-18


    層出鐮孢菌是Fusarium屬的微生物,原產地為中國。菌絲細、有隔, 大型分生孢子微彎曲呈鐮刀形, 具3~ 5 隔;小型分生孢子棒形, 0~ 1 隔, 鏈狀著生在分生孢子梗上, 孢子鏈對生呈“V ”型。不產生厚垣孢子。主要用途為研究;教學。 

    一、菌種簡介
    平臺編號:Bio-19359
    規格:培養物
    拉丁屬名:Fusarium Proliferatum
    中文名稱:鐮刀菌屬
    拉丁屬名:Fusarium
    種名加詞:proliferatum (Matsush.) Nirenberg ex Gerlach & Nir
    收藏時間*:2007-11-5
    來源歷史:北京林業大學
    原產國:中國
    資源歸類編碼:15151916102
    模式菌株:非模式菌株
    主要用途:研究;教學
    特征特性:菌絲細、有隔, 大型分生孢子微彎曲呈鐮刀形, 具3~ 5 隔; 小型分生孢子棒形, 0~ 1 隔, 鏈狀著生在分生孢子梗上, 孢子鏈對生呈“V ”型。不產生厚垣孢子
    生物危害程度:四類
    寄主中文名稱:合歡
    致病對象:植物
    分離基物:合歡
    采集地區:甘肅天水
    采集具體地點:花壇
    培養基信息:培養基編號: 14 培養基名稱: PDA
    培養溫度:25
    資源保護類型:培養物
    保藏方法:定期移植法
    共享方式:資源交換性共享
    提供形式:斜面培養物
    實物狀態:有實物
    用途:研究
    注意事項:僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產品信息以出庫為準)

    二、培養方法
    1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種(一種)、原種(二種)和栽培種(三種)三。工業發酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。
    2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純生產菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。
    3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備(見圖) 菌種制備 ,其中(1)~(4)為孢子制備過程。
    4、保存在沙土管或冷凍管中的生產菌種,用無菌手續挑取少許,接入瓊脂斜面培養基上,在25℃(或較高溫度)下培養5~7天(或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數采用大米、小米之類的天然培養基)。
    5、將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養基上,于25~28℃培養14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續使用半年左右。
    放線菌孢子的培養基大多是采用麩皮或豌豆浸出液及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養基中,于28~37℃培養5~14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐(6)的種子。
    6、如果有些生產菌種不產孢子,如赤霉素產生菌或產孢子不多的,則可采用搖瓶(5)液體培養制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發酵罐(7)的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。

    三、實驗內容
    1、稱量→溶化→調pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查 
    2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物 
    3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查 
    4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌

    四、操作流程
    菌株復蘇:(按三區劃線法將留菌管內的原始菌株進行復蘇)
    1)所有菌株,顯色培養基分4區,每區一株,標明菌株號、菌種名常用縮寫如下:
    cal: 白念珠菌 cgl:光滑念珠菌 cpa: 近平滑念珠菌 ctr: 熱帶念珠菌 ckr: 克柔念珠菌 cne: 新型隱球菌,其他菌種標記全名
    2)隱球菌除傳顯色培養基以外,另傳1/2塊血平皿上述菌株統一37oC孵育48h
    菌種鑒定:(48h后觀察結果)

    五、注意事項
    1、菌種常規培養時間:細菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。
    2、菌種恢復培養前,建議將收到的菌種安瓿保存在 6-10°C 的環境下,某些菌種經過冷凍干燥保存后處于休眠狀態,延遲期較長,如在說明建議的培養時間還未長起來,請繼續在相應的環境下多培養 24 小時或者更長時間,直至菌種培養完成,有的菌種需要連續兩次繼代培養才能正常生長,一般來說菌種培養穩定后才能用于您的后續實驗。
    3、初次使用時請嚴格按照本說明書推薦條件和操作步驟進行復活培養,如使用其它類型培養基或培養條件造成菌種不活等損失,我單位不負責任。
    4、恢復培養厭氧菌時,在操作過程中應嚴格控制厭氧條件:制作培養基時,應使用厭氧螺口試管,并利用高純氮氣去除試管和培養基中的氧氣,使用者應保證菌種的安全存儲和操作,帶菌廢棄物應高壓滅菌處理后丟棄。
    5、與菌種相關的其它信息請參閱微生物菌種查詢網網站(www.pok44.com)。

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